小泰勒蟲qPCR陽(yáng)性對(duì)照Ct值確定、梯度標(biāo)定等相關(guān)背景,可從以下維度判斷陽(yáng)性對(duì)照是否合格:
一、基礎(chǔ)擴(kuò)增有效性判定
?擴(kuò)增曲線?:呈現(xiàn)典型平滑S型曲線,無(wú)鋸齒、無(wú)異常起跳,符合qPCR擴(kuò)增特征。
?Ct值范圍?:強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照Ct值穩(wěn)定落在20~28區(qū)間,弱陽(yáng)性對(duì)照Ct值處于32~35區(qū)間,無(wú)無(wú)擴(kuò)增或Ct值異常漂移情況。
?重復(fù)性?:陽(yáng)性對(duì)照復(fù)孔的Ct值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)≤30%,批間重復(fù)結(jié)果穩(wěn)定。
二、特異性與體系合規(guī)性判定
?熔解曲線?:染料法實(shí)驗(yàn)中,陽(yáng)性對(duì)照熔解曲線為單一尖銳峰,Tm值符合小泰勒蟲靶基因的預(yù)設(shè)溫度范圍。
?對(duì)照聯(lián)動(dòng)驗(yàn)證?:同批次的陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增、無(wú)Ct值,證明陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增信號(hào)并非來(lái)自體系污染。
?擴(kuò)增效率?:通過(guò)梯度標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線,擴(kuò)增效率需在90%~110%之間,驗(yàn)證陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增處于正常區(qū)間。
三、結(jié)果最終判定
滿足以上所有條件,即可判定該小泰勒蟲qPCR陽(yáng)性對(duì)照合格,本次實(shí)驗(yàn)體系有效,待測(cè)樣本的結(jié)果具備可信度。